Test des produits stériles
| Article | Référence |
|---|---|
| Test de stérilité par filtration sur membrane (membrane MCE) | 7130015 |
| Test de stérilité par filtration sur membrane (membrane PDF) | 7130016 |
| Test de stérilité avec chargement direct | 7130005 |
| Validation test de stérilité par colonie bactérienne (6 échantillons de colonie sont nécessaires) | 7130020 |
Ce test est réalisé sur des solutions aqueuses stériles (parentérales, solutions d'extraction ou de rinçage et autres solutions stériles), des solides hydrosolubles, des liquides huileux et des pommades et crèmes.
Un test de stérilité est effectué pour montrer que les produits examinés sont exempts de contamination microbiologique. Le test de stérilité étant un test destructif, seuls les échantillons provenant d'un lot bien déterminé peuvent être testés.
Les échantillons, leur volume et leur quantité sont spécifiés dans la pharmacopée respective (par exemple Ph. Eur. : Tab. 2.6.1-2 : Quantités minimales d'échantillons pour chaque milieu nutritif et Tab. 2.6.1-3 : Nombre minimum d'unités à tester)
L'importance d'un test stérile en ce qui concerne la stérilité de l'ensemble du lot est donc limitée. Toutefois, elle sera d'autant plus grande si des paramètres supplémentaires sont respectés ou vérifiés, tels que:
- la stérilisation s'effectue selon un procédé validé
- une quantité adéquate de bioindicateurs pour lesquels une réduction de 10⁶ de la contamination peut être démontrée, est judicieusement répartie dans chaque lot de stérilisation
- il existe une procédure d'échantillonnage efficace
PIC/S: Guide to good manufacturing practice for medicinal products Annex 1 01.05.2021
USP: United States Pharmacopeia <71> Sterility (version actuelle valide)
Ph. Eur.: Pharmacopée européenne 2.6.1. Test de stérilité (version actuelle valide)
EudraLex:
- The Rules Governing Medicinal Products in the European Union Volume 4
- EU Guidelines to Good Manufacturing Practice
- Medicinal Products for Human and Veterinary Use
- Annex 1 Manufacture of Sterile Medicinal Products
Test des produits non stériles
| Article | Référence |
|---|---|
| Détermination de la charge bactérienne | 7140005 |
| Détermination de la teneur en germes en surface | 7150025 |
| Détermination d’une conservation antimicrobienne suffisante | 7130018 |
| Test de bandelette de spores | 7100011 |
Ce test est réalisé pour déterminer la charge bactérienne (comptage de la population de micro-organismes viables) sur ou dans les produits (notamment les dispositifs médicaux), les composants, les matières premières ou les emballages.
En particulier, les techniques de travail de base du placage et de la filtration sur membrane sont décrites dans le règlement d'essais interne et répondent aux exigences des pharmacopées.
Le terme « bioburde » ou charge biologique fait référence au nombre total de micro-organismes viables présents sur un matériau ou un produit. Puisqu'il n'est pas possible de déterminer la charge bactérienne exacte, le nombre de bactéries est déterminé selon une procédure définie, adaptée et validée pour le produit concerné.
La connaissance de la charge microbienne est importante pour:
- le contrôle de routine du processus de fabrication d'un produit stérile
- déterminer les conditions de stérilisation
- évaluer l'efficacité des processus de nettoyage
- vérifier si un produit a été suffisamment conservé (voir Ph. Eur. 5.1.3.)
- contrôler la qualité des matières premières et des produits finis (voir Ph. Eur. 5.1.4.)
- validations des processus
Les valeurs limites pour les préparations pharmaceutiques figurent dans Ph. Eur. 5.1.4.
DIN EN ISO 11737-1 10-2021: Stérilisation des dispositifs médicaux - Procédés microbiologiques-Partie 1 : Détermination de la population de micro-organismes sur les produits
Ph. Eur. 2.6.12: Contrôles microbiologiques des produits non stériles : comptage du nombre total de germes capables de se reproduire
Ph. Eur. 5.1.4: Qualité microbiologique des préparations pharmaceutiques
USP 61: Microbial limit tests
D'autres tests incluent des tests de stabilité en ce qui concerne la conservation conformément aux spécifications suivantes:
Ph. Eur. 5.1.3: Test de l‘efficacité de la conservation
USP 51: Antimicrobial Effectiveness Testing
En général, une méthode spécifique de décision (DIN EN ISO 11737-1 A.6.1.1 Annexe A et B) est utilisée pour sélectionner la procédure appropriée.
Il existe différentes méthodes pour réaliser chacune des 4 étapes décrites dans la réglementation DIN EN ISO 11737-1. Les méthodes utilisées par ACILA AG sont faciles à reproduire et ont été déterminées sur la base de l'expérience. ACILA AG procède donc de la façon suivante:
- Étape 1: C’est une méthode d’élution ou d’agitation/mélange pour une inoculation. Le choix dépend du type de produit (voir annexe 1)
- Étape 2: Par défaut, 2 méthodes sont utilisées:
- Filtration membranaire: D’abord, la filtration du produit à tester sur membrane avec transfert ultérieur des filtres contaminés sur des milieux de culture appropriés. Cela permet ainsi le développement de colonies de bactéries aérobies et anaérobies, ainsi que de levures et de moisissures.
- Méthode de stries sur plaque: On effectue directement l'étalement du produit, ou bien d'un produit déjà transformé ou d’une élution, sur des milieux nutritifs appropriés. Cela toujours dans un but de permettre la croissance de germes aérobies et anaérobies, ainsi que de levures et de moisissures.
- Étape 3 : Cette étape a lieu avec le processus d'inoculation du produit
- Étape 4 : Comptage manuel des unités formant colonies (UFC, CFU)
Différentes méthodes peuvent également être utilisées pour valider les procédures, toutes décrites dans la norme DIN EN ISO 11737-1. ACILA AG effectue la validation en utilisant la méthode d'élution de micro-organismes, avec laquelle un nombre connu de germes doit être éliminé du produit après contamination du produit puis récupéré.
Il n'existe pas de valeurs limites admissibles pour le nombre initial de germes des dispositifs médicaux. Ils doivent être déterminés et documentés lors de la détermination de routine sur la base des données créées. En général, on suppose une charge germinale <100 UFC/appareil.
Test des endotoxines bactériennes
Les méthodes suivantes sont mises en œuvre chez ACILA:
1. Ph. Eur. : 2.6.14 Test LAL - détection ou dosage d'endotoxines de bactéries à Gram négatif à l'aide de lysat d’amoebocytes de Limulus selon:
- 1.1 Méthode par gélification
- 1.2 Méthode turbidimétrique cinétique
- 1.3 Méthode chromogénique cinétique
Références normatives:
Pharmacopée Européenne (Ph. Eur.): 2.6.14 Recherche d'endotoxines bactériennes
United States Pharmacopeia (USP):
- <85> Bacterial Endotoxins
- <1225> (Validation of Compendial Procedures)
- <1226> (Verification of Compendial Procedures)
- <161> Transfusion and infusion assemblies and similar medical devices
American National Standard: ANSI/AAMI ST72:2019 (Bacterial endotoxins- test methods, routine monitoring and alternatives to batch testing)
1.1 Méthode par gélification:
| Article | Référence |
|---|---|
| Validation de la détermination des endotoxines selon la méthode A, Ph. Eur. & USP (gélification) | 7111017 |
| Détermination des endotoxines (quantitative) selon la méthode B, Ph. Eur. & USP (gélification) | 7112005 |
| Test limite d'endotoxines selon la méthode A, Ph. Eur. et USP (gélification) | 7113004 |
| Caractérisation des produits endotoxines selon la méthode B, Ph. Eur. & USP (gélification) | 7112024 |
(Les références 7112005 & 7113004 concernent les analyses de produits qui ont été préalablement été validés avec succès sur au moins trois lots de production.)
En ce qui concerne les méthodes par gélification, une distinction est faite entre le contrôle des valeurs limites (méthode A) et la détermination quantitative (méthode B). Ces méthodes sont basées sur une réaction du lysat d’amoebocytes à environ 37 °C avec des endotoxines bactériennes, qui s'accompagne d'une formation de gel.
1.2 Méthode turbidimétrique cinétique:
| Article | Référence |
|---|---|
| Validation de la détermination des endotoxines selon la méthode C, Ph. Eur. & USP (turbidimétrique cinétique) | 7111018 |
| Détermination des endotoxines (quantitative) selon la méthode C, Ph. Eur. & USP (turbidimétrique cinétique) | 7112010 |
| Test limite d'endotoxines selon la méthode C, Ph. Eur. et USP (turbidimétrique cinétique) | 7113005 |
| Caractérisation des produits endotoxines selon la méthode C, Ph. Eur. et USP (turbidimétrique cinétique) | 7112025 |
(Les références 7112010 & 7113005 concernent les analyses de produits qui ont été préalablement été validés avec succès sur au moins trois lots de production.)
Le test est basé sur une réaction du lysat d’amoebocytes à environ 37 °C avec des endotoxines bactériennes, qui s'accompagne d'une turbidité. La turbidité est mesurée avec un photomètre. Le temps de réaction (temps d'apparition), c'est-à-dire le temps qui s'écoule jusqu'à ce qu'une valeur seuil souhaitée soit atteinte, sert de mesure de la teneur en endotoxines d'un échantillon. Les logarithmes en base 10 des concentrations standards utilisées et les temps de réaction mesurés sont utilisés pour tracer un diagramme. On se sert des points d’intersection pour créer une ligne droite servant de standard. La teneur en endotoxines d'un échantillon inconnu est calculée à l'aide de cette ligne standard. La gamme de la ligne standard couvre généralement des concentrations d’endotoxines de 1 à 0,001 U.I./ml. Les mesures dans ce domaine peuvent être évaluées. Cela signifie que la limite inférieure de détection des endotoxines dans une solution de test est de 0,001 U.I./ml.
1.3 Méthode chromogénique cinétique
| Article | Référence |
|---|---|
| Validation de la détermination des endotoxines selon la méthode D, Ph. Eur. & USP (chromogénique cinétique) | 7111016 |
| Détermination des endotoxines (quantitative) selon la méthode D, Ph. Eur. & USP (chromogénique cinétique) | 7112015 |
| Test limite d'endotoxines selon la méthode D, Ph. Eur. et USP (chromogénique cinétique) | 7113006 |
| Caractérisation des produits endotoxines selon la méthode D, Ph. Eur. & USP (chromogénique cinétique) | 7112026 |
Les endotoxines catalysent l'activation d'une proenzyme dans le lysat d’amoebocyte de Limulus. L'activation est déterminée par la concentration d'endotoxines. L'enzyme activée catalyse la séparation de la p-nitroaniline (pNA) du substrat incolore (Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA). La concentration d'endotoxine dans un échantillon pendant le temps de réaction est calculée par rapport au temps de réaction de solutions étalons, contenant des quantités connues d'endotoxine standard (courbe standard). La plage de la courbe standard couvre généralement des concentrations d'endotoxines de 0,001 à 1,0 U.I./ml.
2. Pharmacopée Européenne, 2.6.32 - Recherche d'endotoxines bactériennes à l'aide du facteur C recombinant (rFC):
| Article | Référence |
|---|---|
| Validation de la détermination des endotoxines selon la méthode rFC, Ph. Eur. | 7213001 |
| Détermination des endotoxines (quantitative) selon la méthode rFC, Ph. Eur. | 7213006 |
| Test limite endotoxines selon la méthode rFC, Ph. Eur. | 7213005 |
| Caractérisation des produits endotoxines selon la méthode rFC, Ph. Eur. | 7213015 |
Ce test est basé sur la séquence génétique du limule. Une méthode fluorimétrique est utilisée ici. Dans le domaine de la détermination des endotoxines bactériennes, la méthode rFC a été mise en œuvre dans un chapitre distinct de la Pharmacopée européenne (Ph. Eur. 2.6.32). Il offre les avantages suivants par rapport au test LAL:
- pas de résultats faussement positifs dus à la présence de β-glucanes
- sensibilité plus élevée
- méthode alternative économe en ressources et durable
La plage de mesure couvre généralement des concentrations d'endotoxines de 0,001 à 1,0 UI/ml.
Test des eaux
ACILA réalise des tests pour vérifier la pureté de l'eau pour injection (WFI). Les méthodes suivantes sont accréditées:
1. Tests selon la Pharmacopée Européenne (Ph. Eur.):
- Tests des produits stériles
- Tests de produits non stériles
- Recherche d'endotoxines bactériennes
- Tests de particules
2. Tests selon les procédures standards:
DIN ISO 11737-1 10-2021: Stérilisation des dispositifs médicaux - Procédés microbiologiques-Partie 1: Détermination de la population de micro-organismes sur les produits
DIN EN ISO 9308-1 2017-09: Qualité de l'eau - Dénombrement des Escherichia coli et des bactéries coliformes - Partie 1: Procédé de filtration sur membrane des eaux à faible flore accompagnante
DIN EN ISO 7899-2 2000-11: Qualité de l'eau - Détection et comptage des entérocoques intestinaux - Partie 2: Méthode par filtration membranaire
DIN EN ISO 16266 2008-05: Qualité de l'eau - détection et comptage de Pseudomonas aeruginosa - méthode de filtration sur membrane
DIN EN ISO 6222 1999-07: Qualité de l'eau - Détermination quantitative des micro-organismes cultivables - Détermination du nombre de colonies par inoculation dans un milieu gélosé nutritif
DIN EN ISO 11731 2019-03: Qualité de l'eau - compter les légionelles